同田专利CN1986536B_一种高纯度紫杉醇化合物的制备方法

专利基本信息

说明书

一种高纯度紫杉醇化合物的制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及植物药物的制备方法，尤其涉及一种高纯度紫杉醇化合物的制备方法。

背景技术

[0002] 紫杉醇（paclitaxol)是一种新型的天然抗癌药物，从红豆杉中提取得到，具有很好的抗癌活性，对多种肿瘤均有明显的疗效，其抗癌机理在于促进微管聚合，形成稳定的不具活性的微管聚合物，从而影响肿瘤细胞的有丝分裂的进行，造成细胞死亡。1992年美国食品药品监督管理局（FDA)批准紫杉醇上市，目前，已证明紫杉醇对乳腺癌、卵巢癌、头颈部肿瘤及非小细胞肺癌有十分显著的疗效，已逐步应用于此几种癌的治疗中。

[0003] 紫杉醇的结构式如下：

[0004]

[0005] 紫杉醇的分子式C47H51NO14,物化特性：熔点222°C，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙

醇、甲醇，不溶于石油醚、正己烷等。

[0006] 目前提取紫杉醇类化合物的方法为吸附柱层析或分配柱层析法，然而该类方法需消耗大量的层析填料，而且在生产过程中需经常更换和清洗、活化填料，不仅使生产成本很高，而且工作量很大，得率低。

[0007]高速逆流色谱技术（High-Speed Countercurrent Chromatography, HSCCC)是近 30年发展起来的一种连续的无需任何固体支持物的高效、快速的液液分配色谱分离技术， 其原理是利用螺旋柱在行星运动时产生的离心力，使互不相溶的两相不断混合，同时保留其中的一相（固体相），利用恒流泵连续输入另一相（流动相），随流动相进入螺旋柱的溶质在两相之间反复分配，按分配系数的次序，被依次洗脱。在流动相中分配比例大的先被洗脱，反之，在固体相中分配比例大的后被洗脱。它避免了固态支持体或载体带来的各种问题——样品容易被吸附、损耗和变性，使其他液相色谱技术进行制备量分离时，其分配效率会明显降低，溶剂消耗量大，HSCCC保证较高峰型分辨率，分离量大、样品无损耗、回收率高、 分离环境缓和，节约溶剂。高速逆流色谱仪能直接进大量粗提物样品或合成混合物，分离结果能够达到相当高的纯度，甚至能直接接质谱仪等仪器。因此，HSCCC具有操作简便，理论回收率为100%，重现性好和分离效率高、分离量较大的特点，已广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化，使其成为制备紫杉醇的较佳手段。 发明内容

[0008] 本发明要解决的技术问题是克服现有分离技术的缺陷，采用高速逆流色谱法 (HSCCC)，提供一种高纯度紫杉醇化合物的制备方法，该方法收率高，成本低。

[0009] 本发明的一种高纯度紫杉醇化合物的制备方法包括如下步骤：

[0010] (1)前处理

[0011] 将200mg-5g紫杉醇粗提物，以20ml_250ml固定相加热溶解待用；

[0012] (2)制备型高速逆流色谱仪分离

[0013] 将溶剂体系A，B，C，D组分按体积比3-7 ： 3-7 ： 3-7 ： 3_7置于分液漏斗中，摇勻静置分层。待平衡一定时间后，将上相和下相分开，上相作为固定相使用，下相作为流动相使用。进样前，先用固定相存满整个柱子，调整主机转速，将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，根据检测器紫外图谱接收目标成分。

[0014] 所述的溶剂A组分是正构烷烃，选自石油醚、正庚烷、正己烷中的一种；

[0015] 所述的溶剂B组分选自乙醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷中的一种；

[0016] 所述的溶剂C组分是脂肪醇或脂肪酮，脂肪醇选自甲醇、乙醇、异丙醇中的一种， 脂肪酮选自丙酮、丁酮中的一种；

[0017] 所述的溶剂D组分为水；

[0018] 所述的溶剂体系体积比是3 ： 7 ： 3 ： 7、3 ： 3 ： 3 ： 4或30 ： 30 ： 70 ： 30 ；

[0019] 所述的溶剂可以优选正己烧一乙醚一甲醇一7jC，体积比3 ： 7 ： 3 ： 3。

[0020] (3)后处理

[0021] 将收集到的紫杉醇流分分别置于圆底烧瓶中减压浓缩至干，得到白色固体，以甲醇一水溶解，于O〜10°C下结晶，过滤干燥后可得到白色细针状结晶，结晶经HPLC检测，纯度在99%以上。

[0022] 本发明方法采用了高速逆流色谱分离技术，是一种连续的无需任何固体支持物的高效、快速的液液分配色谱分离技术，它克服了固态支持物或载体不可逆吸附、损耗和变性，使被分离物回收率高，理论达100%，本发明实际达到99%以上。又因为采用优选的溶剂体系，可以高效率的分离，获得高纯度的紫杉醇化合物单体（达到99%以上），适用于各种工艺途径制备的紫杉醇提取物。本生产方法采用的原料为市售各种规格的紫杉醇粗提物，采用制备型高速逆流色谱系统分离，经一次分离后可得到紫杉醇。

[0023] 本方法保证了较高峰形分辨度，具有分离量大、回收率高、分离环境缓和、节约溶剂、操作简便等优点，适合从试验室制备到工业化生产的各种规模的紫杉醇分离制备。

附图说明

[0024] 图1是高纯度紫杉醇化合物的制备过程。 具体实施方式

[0025] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

[0026] 实施例1

[0027] 采用柱容积为300ml的高速逆流色谱系统分离（配有NS-1007泵，8823A-UV紫外检测器和^kogaWa3057便携式记录仪)。选取正己烷一乙酸乙酯一丙酮一水作为溶剂体系，按7 :3:5: 5体积比将上述溶剂组分配置于分液漏斗中，摇勻后静置分层。待平衡一段时间后，将上相（固定相）和下相（流动相）分开。

[0028] 称取200mg紫杉醇粗提物，以20ml固定相加热溶解待用。进样前，用固定相存满整个柱子，调整主机转速，将流动相泵入柱内直至建立动态平衡，由进样阀进样；然后根据检测图谱，接收目标成分。目标馏分蒸干后用甲醇结晶可得到紫杉醇的白色细针状结晶，经过HPLC-UV的检测，纯度在99%以上。

[0029] 实施例2

[0030] 采用柱容积为IOOOml的高速逆流色谱系统分离。选取石油醚一氯仿一甲醇一水作为溶剂体系，按3 :7:3: 5体积比将上述溶剂组分配置于分液漏斗中，摇勻后静置分层。待平衡一段时间后，将上相（固定相）和下相（流动相）分开。

[0031] 称取Ig紫杉醇粗提物，以50ml固定相加热溶解待用。进样前，用固定相存满整个柱子，调整主机转速，将流动相泵入柱内直至建立动态平衡，由进样阀进样；然后根据检测图谱，接收目标成分。目标馏分蒸干后用甲醇结晶可得到紫杉醇的白色细针状结晶，经过 HPLC-UV的检测，纯度在99%以上。

[0032] 实施例3

[0033] 采用柱容积为5000ml的高速逆流色谱系统分离。选取石油醚一乙醚一乙醇一水作为溶剂体系，按70 ： 70 ： 30 ： 70体积比将上述溶剂组分配置于分液漏斗中，摇勻后静置分层。待平衡一段时间后，将上相（固定相）和下相（流动相）分开。

[0034] 称取5g紫杉醇粗提物，以250ml固定相加热溶解待用。进样前，用固定相存满整个柱子，调整主机转速，将流动相泵入柱内直至建立动态平衡，由进样阀进样；然后根据检测图谱，接收目标成分。目标馏分蒸干后用甲醇结晶可得到紫杉醇的白色细针状结晶，经过 HPLC-UV的检测，纯度在99%以上。