专利基本信息
| 申请号 | CN201310754398.3 | 申请日 | 2013-12-31 |
| 公开（公告）号 | CN103804387A | 公开（公告）日 | 2014-05-21 |
| 申请公布号 | CN103804387A | 申请公布日 | 2014-05-21 |
| 分类号 | C07D493/04(2006.01)I | 分类 | 有机化学〔2〕 |
| 发明人 | 王维娜;邓力 | 申请（专利权）人 | |
| 代理机构 | 上海泰能知识产权代理事务所 | 代理人 | 上海同田生物技术股份有限公司 |
| 地址 | 201203 上海市浦东新区张江高科技园区爱迪生路326号301室 | ||
| 摘要 | 本发明涉及一种高纯度蟛蜞菊内酯的制备方法，包括：墨旱莲原料粉碎，加入5-10倍量工业甲醇溶液超声提取2-3次，提取液浓缩后用乙酸乙酯萃取，收集萃取液回收试剂加入硅胶柱吸附，用体积比为5:1～50:1的石油醚和乙酸乙酯等度洗脱，洗脱液浓缩得到粗提物，再用高速逆流色谱仪分离，紫外检测器在线监测，收集流份减压浓缩，结晶，干燥即得。本发明采用硅胶柱吸附，并使用石油醚和乙酸乙酯等度洗脱，操作简便，回收率高，分离量大，低污染，得到的蟛蜞菊内酯纯度高，具有良好的应用前景。 | ||
说明书
一种高纯度蟛蜞菊内酯的制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于天然药物化学领域，特别涉及一种高纯度蟛蜞菊内酯的制备方法。
背景技术
[0002] 墨旱莲(Eclipta prostrata L )俗称旱莲草，菊科鳢肠的地上干燥部分，为常用中药之一，具有滋肝补肾，凉血止血之功能。国外研究认为，墨旱莲抗肝毒的主要活性成分是香豆素类物质——膨蜞菊内酯与去甲蟛蜞菊内酯。这两种成分对CCl4、GalNAc等所致大鼠肝损伤，均有明显的肝保护作用，且以蟛蜞菊内酯的作用更强。蟛蜞菊内脂是墨旱莲的主要有效成分，为墨旱莲及其提取物的质量标准及检测用重要特征性物质。
[0003] 蟛蜞菊内酯，CAS号524-12-9，分子式C16HltlO7，分子量314.25，分子结构式如下:
[0004]
[0005] 常规制备蟛蜞菊内酯的方法多为反复柱层析分离，存在占地面积大，溶剂大量使用，对环境和操作人员造成不良影响，且工艺重复性差，生产成本高登缺点。高速逆流色谱仪操作简便，制备量大，样品无损耗，分离效率高，低污染。现已广泛应用于生物，医药，环保等领域化学物质的制备分离和纯化。
[0006] CN103265554A公开了一种去甲蟛蜞菊内酯的制备方法，墨旱莲用甲醇溶液超声提取、乙酸乙酯萃取后采用大孔树脂吸附，然后用甲醇溶液洗脱，但是其得到的去甲蟛蜞菊内酯纯度不高，仍需进一步改进。
发明内容
[0007] 本发明所要解决的技术问题是提供一种高纯度蟛蜞菊内酯的制备方法，该方法采用硅胶柱吸附，并使用石油醚和乙酸乙酯等度洗脱，操作简便，回收率高，分离量大，低污染，得到的蟛蜞菊内酯纯度高，具有良好的应用前景。
[0008] 本发明的一种高纯度蟛蜞菊内酯的制备方法，包括:
[0009] 墨旱莲原料粉碎，加入5-10倍量工业甲醇溶液超声提取2-3次，提取液浓缩后用乙酸乙酯萃取，收集萃取液回收试剂加入硅胶柱吸附，用体积比为5:1~50:1的石油醚和乙酸乙酯等度洗脱，洗脱液浓缩得到粗提物，再用高速逆流色谱仪分离，紫外检测器在线监测，收集流份减压浓缩，结晶，干燥即得；其中，高速逆流色谱仪所用溶剂为体积比为
0.1-2:1-3:0.5-4:1-3的正己烷、乙酸乙酯、乙醇和水。
[0010] 所述硅胶的规格为柱层析用100-500目。[0011] 所述高速逆流色谱仪分离条件为:取上相做固定相，下相为流动相，主机转速为700-1000rpm，流速为 l_4ml/min，水浴温度为 10_35°C。
[0012] 所述结晶采用甲醇、乙醇、水中的一种或两种结晶。
[0013] 有益效果
[0014] 本发明采用硅胶柱吸附，并使用石油醚和乙酸乙酯等度洗脱，操作简便，回收率高，分离量大，低污染，得到的蟛蜞菊内酯纯度高；适用各种型号高速逆流色谱仪(HSCCC)和各种含量蟛蜞菊内酯的制备，易于实现产业化放大。
具体实施方式
[0015] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0016] 实施例1
[0017] 墨旱莲原料粉碎，称2kg，每次加入10L50%甲醇溶液超声提取30分钟，提取3次，提取液减压浓缩至1000ml，加等体积水饱和乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙酯得萃取物。萃取物用100-200目硅胶和乙酸乙酯拌样，加入到硅胶柱层析，用石油醚/乙酸乙酯(体积比50:1)洗脱，洗脱液减压浓缩得粗提物，用于高速逆流分离。取正己烷、乙酸乙酯、乙醇、水按体积比1:3:1:2混合，振摇后静置分层。取上相注满高速逆流色谱仪作为固定相，转动主机，转速800rpm,同时以2ml/min泵入下相做流动相,建立动态平衡后,用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集目标成分，连续制备，合并回收试剂，浓缩后甲醇结晶，得`到蟛蜞菊内酯3g，经HPLC检测，含量98.9%，经UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征其物理性状的数据与现有技术相一致。
[0018] 实施例2
[0019] 墨旱莲原料粉碎，称2kg，每次加入20L60%甲醇溶液超声提取30分钟，提取3次，提取液减压浓缩至1000ml，加等体积水饱和乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙酯得萃取物。萃取物用100-200目硅胶和乙酸乙酯拌样，加入到硅胶柱层析，用石油醚/乙酸乙酯(体积比40:1)洗脱，洗脱液减压浓缩得粗提物，用于高速逆流分离。取正己烷、乙酸乙酯、乙醇、水按体积比0.5:2:1:3混合，振摇后静置分层。取上相注满高速逆流色谱仪作为固定相，转动主机，转速800rpm,同时以2ml/min泵入下相做流动相，建立动态平衡后,用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集目标成分，连续制备，合并回收试剂，浓缩后甲醇结晶，得到蟛蜞菊内酯3.2g，经HPLC检测，含量98.6%，经UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征其物理性状的数据与现有技术相一致。
[0020] 实施例3
[0021] 墨旱莲原料粉碎，称2kg，每次加入17L70%甲醇溶液超声提取30分钟，提取3次，提取液减压浓缩至1000ml，加等体积水饱和乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙酯得萃取物。萃取物用100-200目硅胶和乙酸乙酯拌样，加入到硅胶柱层析，用石油醚/乙酸乙酯(体积比15:1)洗脱，洗脱液减压浓缩得粗提物，用于高速逆流分离。取正己烷、乙酸乙酯、乙醇、水按体积比0.5:1:1:2混合，振摇后静置分层。取上相注满高速逆流色谱仪作为固定相，转动主机，转速850rpm,同时以3ml/min泵入下相做流动相,建立动态平衡后,用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集目标成分，连续制备，合并回收试剂，浓缩后甲醇结晶，得到蟛蜞菊内酯3.9g，经HPLC检测，含量98.3%，经UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征其物理性状的数据与现有技术相一致。
[0022] 实施例4
[0023] 墨旱莲原料粉碎，称2kg，每次加入15L70%甲醇溶液超声提取30分钟，提取3次，提取液减压浓缩至1000ml，加等体积水饱和乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙酯得萃取物。萃取物用100-200目硅胶和乙酸乙酯拌样，加入到硅胶柱层析，用石油醚/乙酸乙酯(体积比5:1)洗脱，洗脱液减压浓缩得粗提物，用于高速逆流分离。取正己烷、乙酸乙酯、乙醇、水按按体积比2:1:2:2.5混合，振摇后静置分层。取上相注满高速逆流色谱仪作为固定相，转动主机，转速900rpm,同时以3.5ml/min泵入下相做流动相,建立动态平衡后，用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集目标成分，连续制备，合并回收试剂，浓缩后甲醇结晶，得到蟛蜞菊内酯2.9g，经HPLC检测，含量99.5%，经UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征 其物理性状的数据与现有技术相一致。
