同田专利CN102030733B_一种高纯度木香内酯和去氢木香内酯的制备方法

专利基本信息

说明书

一种高纯度木香内酯和去氢木香内酯的制备方法

技术领域

[0001 ] 本发明属于木香所含内酯的制备领域，特别涉及一种高纯度木香内酯和去氢木香 内酯的制备方法。

背景技术

[0002] 木香为菊科云木香属植物木香（Auckland ia IappaDecne)的干燥根，具行气止 痛、健脾消食之功效，临床上主要用于溃疡病、胆绞痛、支气管哮喘等疾病的治疗。木香主要 含挥发油，其主要成分是木香烃内酯和去氢木香内酯，二者具有松弛平滑肌和解痉作用，是 木香的主要活性成分，也是木香质量控制的重要指标。木香内酯等内酯成分以及去内酯挥 发油均能对抗组胺、乙酰胆碱与氯化钡引起的支气管收缩作用，其中以二氢木香内酯作用 较强。

[0003] 木香内酯的结构式如下：

[0004]

[0005] 木香烃内酯的结构式如下

[0006]

[0007] 高速逆流色谱技术（High-SpeedCountercurrent Chromatography，HSCCC)是近 30年发展起来的一种连续的无需任何固体支持物的高效、快速的液液分配色谱分离技术， 其原理是利用螺旋柱在行星式的运动时产生的离心力，使互不相溶的两相不断混合，同时 保留其中的一相（固定相），利用恒流泵连续输入另一相（流动相），随流动相进入螺旋柱 的溶质在两相之间反复分配，按分配系数的次序，被依次洗脱。在流动相中分配比例大的 先被洗脱，反之，在固定相中分配比例大的后被洗脱。传统的液相色谱技术进行制备量分离 时，分配效率低，溶剂消耗量大，而且固态支持体或载体会带来样品被吸附、损耗和变性等 问题。而HSCCC能保证较高峰型分辨率，具有操作简便，分离量大，样品无损耗，分离效率 高，理论回收率为100%，重现性好和分离环境缓和等优点，现已广泛应用于生物、医药、环 保等领域化学物质的制备分离和纯化。

发明内容

[0008] 本发明所要解决的技术问题是提供一种高纯度木香内酯和去氢木香内酯的制备 方法。该方法克服传统分离技术的缺陷，采用高速逆流色谱法（HSCCC)制备高纯度木香酯 和去氢木香内酯的方法，该方法操作简便，回收率高，分离量大。

[0009] 本发明的一种高纯度木香内酯和去氢木香内酯的制备方法，包括：

[0010] (1)将A组分、B组分、C组分和D组分按体积比1-5 : 0.5-1 : 1-5 : 5-10混合 后置于分液漏斗中，摇匀静置分层，待平衡20-40分钟后，将上相和下相分开，即得该溶剂 体系；其中A组分为乙酸甲酯、乙酸乙酯或乙酸丁酯；B组分为正丙醇或正丁醇；C组分为乙 醇或甲醇；D组分为水；

[0011] (2)选择上相为固定相，下相为流动相，先用固定相充满逆流色谱仪柱子，调节主 机转速为600-1000rpm，将流动相以0. 5-5. Oml/min的流速泵入柱内，待整个体系建立动态 平衡后，由进样阀进样；

[0012] (3)根据检测器紫外图谱接收目标成分，将流分进行浓缩、结晶，得到木香内酯和 去氢木香内酯。

[0013] 上述溶剂体系优选为乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水体系。

[0014] 所述步骤（2)中所进的样品的制备方法为：将木香提取物溶于上相和下相中。

[0015] 所述步骤⑴中的溶剂体系为乙酸乙酯-正丙醇-甲醇-水，该四组分的体积比依 次为：1 : I : 1 : 7;所述步骤（2)中的主机转速850rpm，流动相泵入柱内的流速为5. Oml/ min〇

[0016] 所述步骤⑴中的溶剂体系为乙酸甲酯-正丙醇-乙醇-水，该四组分的体积比 依次为：4 : 0. 8 : 2 : 6;所述步骤（2)中的主机转速950rpm，流动相泵入柱内的流速为 0· 5ml/min〇

[0017] 所述步骤⑴中的溶剂体系为乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水，该四组分的体积比 依次为：3 : 0. 5 : 1 : 8;所述步骤（2)中的主机转速650rpm，流动相泵入柱内的流速为 3. Oml/min。

[0018] 所述步骤⑴中的溶剂体系为乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水，该四组分的体积比 依次为: 0. 7 : 2 : 9;所述步骤（2)中的主机转速600rpm，流动相泵入柱内的流速为 L Oml/min。

[0019] 所述步骤⑴中的溶剂体系为乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水，该四组分的体积比 依次为：2 : 0.8 : 3 : 1;所述步骤（2)中的主机转速700rpm，流动相泵入柱内的流速为 2. Oml/min。

[0020] 所述步骤⑴中的溶剂体系为乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水，该四组分的体积比 依次为：5 : 0. 5 : 4 : 7;所述步骤（2)中的主机转速800rpm，流动相泵入柱内的流速为 3. Oml/min。所述步骤（1)中的溶剂体系为乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水，该四组分的体积 比依次为：4 : 1 : 4 : 5;所述步骤（2)中的主机转速lOOOrpm，流动相泵入柱内的流速为 4. Oml/min。

[0021] 所述步骤（1)中的溶剂体系为乙酸丁酯-正丙醇-乙醇-水，该四组分的体积比依 次为：4 : I : 1 : 6;所述步骤（2)中的主机转速750rpm，流动相泵入柱内的流速为4. Oml/ min〇

[0022] 根据溶解度常数，在不破坏体系平衡的情况下，调节A，B，C，D四组分的体积比。

[0023] 实验条件适合温度20_40°C，在上述温度范围内，温度较高时，出峰时间略有提前， 分离效果变化不大，对峰形无多大影响。

[0024] 主机转速和流速需控制在一定范围内，按体积比将溶剂体系置于分液漏斗中，摇 匀静置分层。待平衡一定时间后，将上相和下相分开，采用TBE-300B高速逆流色谱仪，该机 型柱体积为300ml，进样圈为20ml，配有TBP-50A泵，TBD-23检测器和N2000色谱工作站。 进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为600-1000rpm，以0. 5-5. Oml/min的流 速将流动相泵入柱内。

[0025] 高纯度是指纯度多98% ;分离和收集到的目标成分，浓缩到一定纯度后要再进行 结晶得到单体。

[0026] 本发明采用了高速逆流色谱分离技术克服了固态支持物或载体不可逆吸附、损耗 和变性，使被分离物回收率高理论达100%，本发明实际达到95%以上，又因为采用优选的 溶剂体系，控制实验条件温度、调整主机转速和流速的工艺条件，可以高效率的分离，获得 高纯度的木香内酯和去氢木香内酯（达到98%以上）。

[0027] 有益效果

[0028] 1、本发明采用了高速逆流色谱分离技术，保证较高峰形分辨度，分离量大、回收率 高、分离环境缓和、节约溶剂、操作简便。

[0029] 2、本发明适合从各种工艺途径制备的木香提取物获得高纯度的木香内酯和去氢 木香内酯（达到98%以上）。

具体实施方式

[0030] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人 员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。

[0031] 实施例1

[0032] 选取乙酸甲酯-正丙醇-乙醇-水体系在半制备型逆流色谱仪上来分离纯化木香 内酯类成分。实验条件适合温度为25°C，先按4 : 0.8 : 2 : 6体积比将上述溶剂组分分 配置于分液漏斗中，振摇后静置分层。待平衡一段时间后，将上相和下相分开。采用半制备 型逆流色谱仪，配有聚四氟乙烯柱，20ml进样阀，柱容积为300ml，配有TBP-50A泵，TBD-23 检测器和N2000色谱工作站。称取IOOmg木香粗样溶解于IOml上相和IOml下相溶液组成 的溶液中待用。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为950rpm，以0. 5ml/min 的流速将流动相泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫 外图谱，接收目标成分，得到木香内酯和去氢木香内酯流分，浓缩冻干后进行结晶，其HPLC 纯度达到98. 8%。

[0033] 实施例2

[0034] 选取乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水体系在半制备型逆流色谱仪上来分离纯化木香 内酯类成分。实验条件适合温度为30°C，先按3 : 0.5 : 1 : 8体积比将上述溶剂组分分配 置于分液漏斗中，振摇后静置分层。待平衡一段时间后，将上相和下相分开。采用半制备型 逆流色谱仪，配有聚四氟乙烯柱，20ml进样阀，柱容积为300ml，配有TBP-50A泵，TBD-23检 测器和N2000色谱工作站。称取150mg木香粗样溶解于IOml上相和IOml下相溶液中待用。 进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为650rpm，以3. Oml/min的流速将流动相 泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外图谱，接收目 标成分，得到木香内酯和去氢木香内酯流分，浓缩后进行结晶，其HPLC纯度达到98. 5%。

[0035] 实施例3

[0036] 选取乙酸丁酯-正丙醇-乙醇-水体系在半制备型逆流色谱仪上来分离纯化木香 内酯类成分。实验条件适合温度为22°C，先按4 : I : 1 : 6体积比将上述溶剂组分分配 置于分液漏斗中，振摇后静置分层。待平衡一段时间后，将上相和下相分开。采用半制备型 逆流色谱仪，配有聚四氟乙烯柱，20ml进样阀，柱容积为300ml，配有TBP-50A泵，TBD-23检 测器和N2000色谱工作站。称取150mg木香粗样溶解于IOml上相和IOml下相溶液中待 用。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为750rpm，以4. Oml/min的流速将流 动相泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外图谱，接 收目标成分，得到木香内酯和去氢木香内酯流分，浓缩冻干后进行结晶，其HPLC纯度达到 98. 9%〇

[0037] 实施例4

[0038] 选取乙酸乙酯-正丙醇-甲醇-水体系在半制备型逆流色谱仪上来分离纯化木香 内酯类成分。实验条件适合温度为40°C，先按I : I : 1 : 7体积比将上述溶剂组分分配 置于分液漏斗中，振摇后静置分层。待平衡一段时间后，将上相和下相分开。采用半制备型 逆流色谱仪，配有聚四氟乙烯柱，20ml进样阀，柱容积为300ml，配有TBP-50A泵，TBD-23检 测器和N2000色谱工作站。称取IOOmg木香粗样溶解于IOml上相和IOml下相溶液中待用。 进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为850rpm，以5. Oml/min的流速将流动相 泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外图谱，接收目 标成分，得到木香内酯和去氢木香内酯流分，浓缩后进行结晶，其HPLC纯度达到98. 2%。

[0039] 实施例5

[0040] 选取乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水体系在半制备型逆流色谱仪上来分离纯化木香 内酯类成分。实验条件适合温度为25°C，先按1 : 0.7 : 2 : 9体积比将上述溶剂组分分 配置于分液漏斗中，振摇后静置分层。待平衡一段时间后，将上相和下相分开。采用半制备 型逆流色谱仪，配有聚四氟乙烯柱，20ml进样阀，柱容积为300ml，配有TBP-50A泵，TBD-23 检测器和N2000色谱工作站。称取150mg木香粗样溶解于IOml上相和IOml下相溶液中待 用。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为600rpm，以1.0 ml/min的流速将流 动相泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外图谱，接 收目标成分，得到木香内酯和去氢木香内酯流分，浓缩后进行结晶，其HPLC纯度达到98% 以上。

[0041] 实施例6

[0042] 选取乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水体系在半制备型逆流色谱仪上来分离纯化木香 内酯类成分。实验条件适合温度为28°C，先按2 : 0.8 : 3 : 10体积比将上述溶剂组分分 配置于分液漏斗中，振摇后静置分层。待平衡一段时间后，将上相和下相分开。采用半制备 型逆流色谱仪，配有聚四氟乙烯柱，20ml进样阀，柱容积为300ml，配有TBP-50A泵，TBD-23 检测器和N2000色谱工作站。称取150mg木香粗样溶解于IOml上相和IOml下相溶液中待 用。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为700rpm，以2. Oml/min的流速将流 动相泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外图谱，接 收目标成分，得到木香内酯和去氢木香内酯流分，浓缩后进行结晶，其HPLC纯度达到98% 以上。

[0043] 实施例7

[0044] 选取乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水体系在半制备型逆流色谱仪上来分离纯化木香 内酯类成分。实验条件适合温度为35°C，先按5 : 0.5 : 4 : 7体积比将上述溶剂组分分 配置于分液漏斗中，振摇后静置分层。待平衡一段时间后，将上相和下相分开。采用半制备 型逆流色谱仪，配有聚四氟乙烯柱，20ml进样阀，柱容积为300ml，配有TBP-50A泵，TBD-23 检测器和N2000色谱工作站。称取150mg木香粗样溶解于IOml上相和IOml下相溶液中待 用。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为800rpm，以3. Oml/min的流速将流 动相泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外图谱，接 收目标成分，得到木香内酯和去氢木香内酯流分，浓缩后进行结晶，其HPLC纯度达到98% 以上。

[0045] 实施例8

[0046] 选取乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水体系在半制备型逆流色谱仪上来分离纯化木香 内酯类成分。实验条件适合温度为38°C，先按4 : 1 : 4 : 5体积比将上述溶剂组分分配 置于分液漏斗中，振摇后静置分层。待平衡一段时间后，将上相和下相分开。采用半制备型 逆流色谱仪，配有聚四氟乙烯柱，20ml进样阀，柱容积为300ml，配有TBP-50A泵，TBD-23检 测器和N2000色谱工作站。称取150mg木香粗样溶解于IOml上相和IOml下相溶液中待用。 进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为lOOOrpm，以4. Oml/min的流速将流动 相泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外图谱，接收 目标成分，得到木香内酯和去氢木香内酯流分，浓缩后进行结晶，其HPLC纯度达到98%以 上。