同田专利CN108164415A_一种从鱼油中完全分离EPA和DHA的方法

专利基本信息

说明书

一种从鱼油中完全分离EPA和DHA的方法

技术领域

[0001]本发明属于不饱和脂肪酸加工技术领域，特别涉及一种从鱼油中完全分离EPA和 DHA的方法。

背景技术

[0002] DHA (二十二碳六烯酸，Docosahexaenoic Acid)是一种《-3必需脂肪酸。研宄表明 DHA是人的大脑发育，成长的重要组成部分;在改善老年痴呆、抗衰老、抗肿瘤等方面有着重 要的生理调节功能。

[0003] EPA (二十碳五烯酸，Eicosapentaenoic Acid)是人体常用的几种《-3脂肪酸之 一。EPA可帮助降低胆固醇和甘油三酯的含量，促进体内饱和脂肪酸代谢。防止脂肪在血管 壁的沉积，预防脑血栓、脑溢血、高血压等心血管疾病。

[0004]鱼油中含有丰富的DHA和EPA。人们先后发明采用了低温分级法、溶剂提取法、尿素 包合法、分子蒸馏法和超临界气体萃取法等方法，从生物体中提取0脱和即八。

[0005]研宄发现，EPA会在婴幼儿早期发育过程中破坏人体内DHa和EPA的平衡。因此，有 必要将EPA和DHA完全分离开来。

[0006]高速逆流色谱(HSCCC)技术是一种新的基于液液分配原理的分离纯化技术，它不 需要任何固态支撑或载体，固定相和流动相皆为液体，无不可逆吸附。

发明内容

[00^7]本发明所要解决的技术问题是提供一种从鱼油中完全分离EPA和DHA的方法，采用 了高速逆流色谱技术，分两步溶剂体系从鱼油中完全分离EPA和DHA，其中溶剂体系一可完 全分离EPA和DHA的混合物和其它杂质;溶剂体系二可完全分离EPA和DHA;得到高纯度的EPA 和 DHA。

[0008]本发明的一种从鱼油中完全分离EPA和DHA的方法，包括：

[0009] (1)将溶剂体系一充分振摇，静置分相，分开收集上、下两相;将鱼油提取物溶解于 上相中，以上相为固定相，下相为流动相，采用高速逆流色谱进行分离，得到只含有EPA和 DHA的混合物与流动相的混合液，去除流动相，得到EPA和DHA的混合物;其中溶剂体系一由 正己烷或正庚烷，乙腈，甲醇按体积比为3〜6:2〜4:1〜2混合而得；

[0010] (2)将溶剂体系二充分振摇，静置分相，分开收集上、下两相;将步骤（1)得到的混 合物溶解于上相中，以上相为固定相，下相为流动相，采用高速逆流色谱进行分离，分别得 至IJEPA与流动相的混合液和DHA与流动相的混合液，去除流动相，分别得到EPA和DHA产品；其 中溶剂体系一由正己纟元或正庚院，甲醇，去罔子水按体积比为15〜30:10〜20:2〜4混合而 得。

[0011]所述步骤(1)和(2)中分开收集得到的上、下两相进行超声脱气处理。 _2]所述步骤⑴中高速逆流色谱的条件为:转向为正转，转速为_準;柱温为25t：; 流动相的流速为5mL/min;检测器的检测波长为214nm。

[0013]所述步骤⑴中的去除流动相的工艺条件为:在45»c、_0.08MPa条件下进行旋转蒸 发真空干燥。 _4]所述步骤⑵中高速逆流色谱的条件为:转向为正转，转速S_rpm;柱温为25t>c; 流动相的流速为lOmL/min;检测器的检测波长为214nm。

[0015]所述步骤(2)中的去除流动相的工艺条件为:在5(TC、-0.08MPa条件下进行旋转兹 发真空干燥。

[0016] 有益效果

[0017] (1)本发明首次利用高速逆流色谱技术从鱼油中同时分离纯化得到高纯度的即八 和 DHA。

[0018] (2)本发明的高速逆流色谱技术具有无样品损耗、无污染、高效、大制备量，溶剂可 回收再利用等优点。

[0019] (3)本发明中采用的两个溶剂体系的试剂皆可回收再利用，理论上EPA和DHA可实 现100%回收。

具体实施方式

[0020] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人 员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。

[0021]本发明实施例中采用的试剂与仪器如下：

[0022]试剂:正己烷、正庚烷、乙腈、甲醇均为国药集团化学试剂有限公司生产的分析纯 试剂，水为去离子水，鱼油提取物为市售产品；

[0023]仪器:高速逆流色谱仪为上海同田生物技术股份有限公司生产的TBE-300C型号高 速逆流色谱仪。

[0024]实施例i

[0025] (1)将正己烷，乙腈，甲醇按体积比为6:4:1混合制得溶剂体系一，加入分液漏斗 中，充分振摇，静置分相，获得两相混合液，分开收集上相和下相溶剂，分别置于超声波振荡 器中进行超声脱气处理，将鱼油提取物溶解于上相溶剂中，然后以上相为固定相，下相为流 动相，采用高速逆流色谱进行分离，其中色谱条件设置为:正转，转速S800rpm;柱温25; 流动相流速5mL/min;检测器的检测波长为214nm，得到只含有EPA和DHA的混合物与流动相 的混合液，置于旋转蒸发器中，在水浴温度45 X：、真空压强-0 • 08MPa条件下进行旋转蒸发真 空干燥，去除流动相，得到EPA和DHA的混合物。

[0026] ⑵将正己烷，甲醇，去离子水按体积比为20:20:3混合制得溶剂体系二，加入分液 漏斗中，充分振摇，静置分相，获得两相混合液，分开收集上相和下相溶剂，分别置于超声波 振荡器中进行超声脱气处理，将步骤（1)得到的EPA和DHA的混合物溶解于上相溶剂中，然后 以上相为固定相，下相为流动相，采用高速逆流色谱进行分离，其中色谱条件设置为:正转， 转速为SOOrpm;柱温25。(：；流动相流速lOmL/min;检测器的检测波长为214nm，分别得到EPA 与流动相的混合液和DHA与流动相的混合液，置于旋转蒸发器中，在水浴温度5(rC、真空压 强-0.08MPa条件下进行旋转蒸发真空干燥，去除流动相，去除流动相，分别得到EPA和腿产 品。

[0027] 通过HPLC对本实施例获得的EPA和DHA产品的纯度进行分析，结果显示:EPA纯度为 99.62 % ; DHA纯度为99.60 %。

[0028] 实施例2

[0029] (1)将正庚烷，乙腈，甲醇按体积比为6:4:1混合制得溶剂体系一，加入分液漏斗 中，充分振摇，静置分相，获得两相混合液，分开收集上相和下相溶剂，分别置于超声波振荡 器中进行超声脱气处理，将鱼油提取物溶解于上相溶剂中，然后以上相为固定相，下相为流 动相，采用高速逆流色谱进行分离，其中色谱条件设置为：正转，转速为800rpm;柱温25。(：； 流动相流速5mL/min;检测器的检测波长为214nm，得到只含有EPA和DHA的混合物与流动相 的混合液，置于旋转蒸发器中，在水浴温度45°C、真空压强-0. OSMPa条件下进行旋转蒸发真 空干燥，去除流动相，去除流动相，得到EPA和DHA的混合物。

[0030] (2)将正庚烷，甲醇，去离子水按体积比为20:20:3混合制得溶剂体系二，加入分液 漏斗中，充分振摇，静置分相，获得两相混合液，分开收集上相和下相溶剂，分别置于超声波 振荡器中进行超声脱气处理，将步骤⑴得到的EPA和DHA的混合物溶解于上相溶剂中，然后 以上相为固定相，下相为流动相，采用高速逆流色谱进行分离，其中色谱条件设置为:正转， 转速为8〇Orpm;柱温25°C;流动相流速lOmL/min;检测器的检测波长为214nm，分别得到EPA 与流动相的混合液和DHA与流动相的混合液，置于旋转蒸发器中，在水浴温度50 °C、真空压 强-0.08MPa条件下进行旋转蒸发真空干燥，去除流动相，分别得到EpA和藤产品。

[0031]通过HPLC对本实施例获得的Epa和DHA产品的纯度进行分析，结果显示:EPA纯度为 96.57%;〇骱纯度为97.18%。